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120次漆酶试剂盒测定意义漆酶(Laccase)是一种含铜的多酚氧化酶,属于铜蓝氧化酶家族,广泛分布于真菌和高等植物中,具有较强的氧化还原能力,在纸浆生物漂白,环境污染物降解和木质纤维素降解以及生物检测方面有非常广泛的应用。
样品测定的准备:
1、细胞、细菌或组织样品的制备 :
细菌或细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,弃上清;按照每100万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),之后置沸水浴振荡提取10min;10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。
组织:称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;之后置沸水浴振荡提取10min,10000g,常温离心10min,取上清,冷却后待测。
2、血清(浆)样品:取100μL血清(浆)加入1mL提取液,充分混匀,之后置沸水浴振荡提取10分钟,10000g,常温离心10分钟,取上清,冷却后待测。
3、标准品的处理:称取1mg,将标准品稀释为15、10、8、6、4、2、1、0 μg/ml。
漆酶试剂盒测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。
2、取0.5mL上清液(或稀释后的标准品)+0.5mL试剂一+0.5mL试剂二于有盖试管中,置沸水浴中保温30min(盖紧,防止水分散失),每10min振荡一次。
3、待冷却后,在试管中加入1mL试剂三,振荡30s,静置片刻,使色素转至试剂三;吸取0.8mL-1mL上层溶液于1mL玻璃比色皿中,用试剂三调零,于520nm波长处比色,记录吸光值。
4、根据标准品吸光值和浓度,建立标准曲线。
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