经典三级视频在线观看 elisa试剂盒 血清学方法琼脂扩散试验操作原理

elisa分析检测试剂盒琼脂扩散试验，又称免疫扩散反应或凝胶沉淀反应，基本原理是可溶性抗原和相应抗体在含有电解质的琼脂凝胶中扩散相遇，特异性地结合形成肉眼可见的线状沉淀物的一种免疫血清学技术。
由于琼脂扩散试验的操作简便，不需要特殊设备，且有较好的特异性和检出率，故已成为一种广泛应用的免疫学技术。在动物病毒学中广泛用于检测病毒抗原和毒型鉴定。应当指出，由于家禽免疫球蛋白的特殊性，琼脂凝胶中的NaCl含量应为8％，而不是通常的0.85％，使用这样的浓度可取得更好的结果。

1.操作方法
(1)抗原及抗体分别加入相应孔中，每孔加入50ul。
(2)加好的板放入湿盒中加盖后置37℃温箱中24小时观察结果。
2.判定
(1)强阳性(＋＋＋)：在被检血清孔与抗原孔之间有明显的沉淀线，并与标准阳性血清的沉淀线末端互相连接者。
(2)阳性(＋＋)：在被检血清孔与抗原孔之间有较弱的沉淀线，并与标准阳性血清的沉淀线末端互相连接者。
(3)弱阳性(＋)：标准阳性血清孔与抗原孔之间的沉淀线末端向被检血清孔内侧弯曲者。
(4)疑似(±)：标准阳性血清孔与抗原孔之间出现的沉淀线末端向被检血清孔内侧偏弯或微弯者。
(5)阴性(－)：被检血清孔与抗原孔之间不形成沉淀线，或者标准阳性血清的沉淀线向相邻的被检血清孔直伸或向外侧偏弯者，判定为阴性。被检血清孔与抗原孔间出现的沉淀线与标准阳性血清的沉淀线呈现交叉现象时，为非特异反应，判为阴性。
3．注意事项
(1)琼脂质量影响试验结果，一般应用精制琼脂粉或琼脂糖配制琼脂凝胶板。
(2)孔径大、孔距小，较易出现沉淀线，但孔距太小，不易鉴别两条以上的沉淀线，故在病毒抗原分析时，孔距不宜太小。
(3)一般认为37℃感作比较容易出沉淀线，但对易于失效的病毒抗原，可置室温或4℃感作。
(4)抗原、抗体的浓度越高，出现沉淀线的时间越快，故必要时，可将抗原、抗体先作适当的浓缩处理。
4．染色
为提高沉淀线的可见度，或需长期保存标本时，可按下述方法处理标本并染色。
(1)漂洗：将琼脂板用绸布包裹后，浸泡于盐水中12小时，其间换液2～3次，再以蒸馏水浸泡5～6小时，其间换液2次，借以除去未结合的蛋白质。
(2)固定：解开绸布，将琼脂板浸入70％酒精配制的2％醋酸溶液中固定1小时。
(3)染色：首先配制醋酸-甲醇液，即取10ml冰醋酸、20ml水和70ml甲醇混合。再取氨基黑的10B0.1g溶于100ml醋酸-甲醇液中，即为氨基黑染色液。
将固定好的琼脂扩散板浸泡于氨基黑染色液中10分钟，再用醋酸-甲醇液洗去底色，干燥后即可长期保存。
elisa分析检测试剂盒琼脂凝胶的含水量极大，常用琼脂凝胶(1％～1.2％)含水98％以上，可使分子量20万以下的大分子物质自由通过。由于大多数抗原和抗体的分子量都在20万以下，所以能在琼脂凝胶中自由扩散。当抗原和抗体相应且比例适当，两者相遇就会出现一条沉淀线。一对抗原和抗体，形成一条沉淀线，故可应用琼脂扩散试验鉴定抗原和抗体成分、抗体的纯度、抗原或抗体的相对效价等。
    1,2,3,4-四氢-1-萘胺    N-异丙基-4哌啶甲酸
二月桂酸二正辛基锡    4-氟-2-(三氟甲基)苯酚    2-溴-6-氰基吡啶
2-氟-3-溴-5-甲基吡啶    3,5-二甲氧基肉桂酸    2-三氟甲基苯磺酰胺
3-溴-2-硝基吡啶    (R)-2-BOC-氨甲基吡咯烷    4-羟基-6,7-二甲氧基喹啉
2-氨基-3-硝基-5-氟吡啶     5-丙氧基-4-甲基-1,2,4-三唑啉酮
2,6-二氟-3-硝基苯胺    组胺磷酸盐    1,4-苯二甲硫醇
4-甲基-5-羟基呋喃-2-酮    2-氯*酮    4-氟苯甲脒盐酸盐
7-羟基-6-甲氧基-3,4-二氢异喹啉    环己甲酰氯    3-甲基-4-异丙基苯酚
4-氟邻苯二甲酸酐    Fmoc-L-3-氰基苯丙氨酸    2-氟-5-硝基苯乙酸
尼可地尔    4-甲氧基-2-氟苯胺盐酸盐    1-((氰基-1-甲基乙基)偶氮)甲酰胺
4-氯-3,5-二硝基苯甲酸    3-(4-甲氧苯基)-3-羰基丙酸甲酯    3-苯基吡啶
4-(4-哌啶基)吗啉    L-甲基多巴    2-甲基烟酸甲酯
1,1-二乙基己烷    3-氯-4-甲基苯甲腈    4-(4-氟苯甲酰基)丁酸
2,3-二氯苯肼盐酸盐    氧化-4-甲基吗啉一水合物    乙酰丙酮亚铁
2-氯-3-硝基苯甲醚    2-氟-4-碘烟酸    丙二醇二乙酸酯
对甲基苯甲醇草酸二酯    3,4-二氨基苯甲腈    4-环戊基吗啉
3-溴噻吩-2-甲酸    3-乙酰基苯硼酸    2-(2-氯乙氧基)乙酸甲酯

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