经典AV三级在线观看 解析细胞的冻存与复苏

细胞，生物学名词。构成生物体的基本单位。体形极微，在显微镜下始能窥见。形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成，表面有薄膜。动植物细胞结构大致相同。植物细胞质膜外有细胞壁，细胞壁中常有质体，动物细胞质中常有中心体，而高等植物细胞中则无。细胞有运动、营养和繁殖等机能。

细胞冻存：

1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射15min；培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水浴箱37℃预热备用；收集   对数生长期细胞，在冻存前一天zui好换液

2．用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入适量胰蛋白酶消化。

3. 适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。

4. 用吸管将培养液加入冻存管中，离心(1000r/min，10分钟)。

5. 去上清液，加入与细胞悬液等量的冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀

6. 冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16～18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1h，   以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

7．记录每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。

细胞复苏

室内紫外消毒；培养基、PBS于37℃恒温水浴预热备用。
自液氮罐中取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，离心。
去上清，加入培养基，吹打，然后移入培养瓶中，用培养基清洗冻存管，清洗液也移入培养瓶中。
于培养瓶中加入适量培养基，放入CO2培养箱中培养
记录复苏日期；次日换液。