经典AV三级在线观看 逆转录后的 qPCR 实验结果不理想分析,比如Ct 值偏大或者普通 PCR 产量低原因分析:
1、 RNA 模板质量差,需要重新制备 RNA 模板,可通过琼脂糖凝胶电泳检测质量。
2、 逆转录后的 cDNA 中含有高浓度的模板 RNA 和逆转录试剂成分,可能会对后续的PCR 产生抑制作用,所以可以适当梯度提高 cDNA 稀释比例(通常来说可将 cDNA 原液稀释5-10倍,其最佳模板加入量以扩增得到的 Ct 值在20-30个循环为好)。
3、 起始的 RNA 模板量低,需要减少稀释倍数或增加 RNA 模板量。
4、 基因本身原因(复杂和长度),可以重新设计复杂基因的引物,避免复杂结构。或者用三步法程序或延长两步法程序的延伸时间。
5、 逆转录或者定量产品性能差,可以通过做平行不用品牌产品对比实验,对比逆转录产品性能。
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