许多因素可以影响pcr的特异性,在此我们作一归纳,供大家参考:
1、退火步骤的严格性:提高退火温度可以减少不匹配的杂交,从而提高特异性。
2、减短退火时间及延伸时间可以减少错误引发及错误延伸。
3、引物二聚体是最常见的副产品,降低引物及酶的浓度也可以减少错误引发,尤其是引物的二聚化。
4、改变mgcl2(有时kcl)浓度可以改进特异性,这可能是提高反应严格性或者对taq酶的直接作用。
一般认为PCR产物应在48h以内完成电泳检测,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型就会出现不规则,甚至消失。
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