经典三级视频在线观看 PCR反应液的污染消除方法

  PCR是非常灵敏的一项检测，100个拷贝之内的靶序列就足以产生阳性扩增，从而容易出现DNA污染导致的假阳性。首先，要辨别PCR污染的来源。设立阴阳性对照，有利于检测反应体系各成分的污染情况。尤其是设立空白对照，即包括PCR的全部组分，而不加模板DNA，这对检测试剂中PCR产物残留污染是非常有益的。

  在排除试剂污染的可能性外，更换试剂后，若不久又发现试剂被污染了，则考虑可能为环境污染。环境污染的最主要原因是DNA溶液的溅出和DNA气溶胶造成的实验区域的污染，这尤其在PCR产物扩增区容易出现。移液器枪头和EP管架是也较常见的污染部位。

  如果是环境污染，还可对每个区域进行涂抹采样和核酸提取，以最终鉴定污染的区域所在。

  对于PCR反应液的污染，可采取以下方法：

1、DNase I 法：

PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室温反应30min后加热灭活，然后加入模板和Taq聚合酶进行正常PCR扩增。

2.、内切酶法：

选择识别4个碱基的内切酶（如MspI和TaqI等），可同时选择几种，以克服用一种酶只能识别特定序列的缺陷，室温作用1h后加热灭活进行PCR。

3、紫外照射法：

未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液进行紫外照射，注意事项与方法同上述UV照射法。

4、尿嘧ding 糖苷酶（UNG）法：

用dUTP代替dTTP，使PCR产物中掺入大量dU。在再次进行PCR扩增前，用UNG处理PCR混合液即可消除PCR产物的残留污染。由于UNG在PCR循环中的变性一步便可被灭活，因此不会影响含dU的新的PCR产物。