经典AV三级在线观看 细胞传代培养实验原理及步骤

实验原理:

传代培养是组织培养常规保种方法之一。也是几乎所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长。这一过程就叫传代。传代培养可获得大量细胞供实验所需。传代要在严格的无菌条件下进行，每一步都需要认真仔细的无菌操作。

实验步骤:

1.入无菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒双手。

2.倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置37℃下预热。

3.超净台台面应整洁，用0.1%新洁尔灭溶液擦净。

4.打开超净台的紫外灯照射台面20min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气，除去臭氧。

5.点燃酒精灯;取出无菌试管，巴斯德吸管和刻度吸管;安上橡皮头;过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。

6.将培养用液瓶口用75%酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。

7.倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3mLHanks液洗去残留的旧培养基，或用少量yi酶涮洗一下。

8.每个大培养瓶加入1mLyi酶，小瓶用量酌减，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离yi酶，然后将yi酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液中。

9.加入少量的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基(7~10mL/大瓶，3~5mL/小瓶)制成细胞悬液，然后分装到新培养瓶中。盖上瓶盖，适度拧紧后再稍回转，以利于CO₂气体的进入，将培养瓶放回CO₂培养箱。

10.对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。可将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。