经典三级视频在线观看 Y190 感受态细胞操作方法

经典三级视频在线观看 Y190 感受态细胞操作方法：  

1.Y190 感受态细胞100ul*50规格取100μl冰上融化的DH5α感受态细胞，加入目的DNA（质粒或连接产物）并轻轻混匀，冰上静置25分钟。  随后，为了确保DNA能够有效进入感受态细胞，我们需要执行一个关键的热激步骤。将含有DNA的感受态细胞混合物迅速转移到预先加热至42°C的水浴中，精确计时90秒。这一短暂的高温处理能够暂时性地改变细胞膜的通透性，允许外源DNA通过。完成热激后，立即将试管重新放回冰上，静置2-3分钟，使细胞膜恢复其原有的稳定性，防止DNA的泄漏。

接下来，为了复苏细胞并表达抗性基因（如果质粒携带的话），需要向管中加入800μl无抗生素的LB培养基，并置于37°C摇床中，以200-250rpm的速度温和振荡培养45分钟至1小时。此过程中，细胞开始分裂并表达任何可能已转入的质粒上的基因，包括可能赋予抗生素抗性的基因。

培养结束后，根据实验需求，我们可以将细胞悬液进行适当稀释，然后取一定体积（如100μl）涂布到含有相应抗生素的LB琼脂平板上。使用无菌的玻璃涂布器轻轻均匀地涂抹，确保细胞均匀分布。之后，将平板倒置放在37°C恒温培养箱中培养过夜，通常为12至16小时。

次日，观察平板上菌落的形成情况。如果转化成功，我们将看到清晰可见的、大小均一的菌落生长，这些菌落即为成功导入了目的DNA的DH5α细胞克隆。至此，感受态细胞的转化实验便告一段落，接下来的步骤将根据实验目的进行质粒提取、酶切验证或进一步的分子生物学分析。

2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。  

3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基（2YT或LB），混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。  

4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应  

抗生素的2YT或LB培养基上。

5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

注意事项：

1.Y190 感受态细胞100ul*50规格感受态细胞在冰上融化。  

2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。  

3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少终用于涂板的菌量。