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经典三级视频在线观看 ELISA临床质量管理的评价管理(2)

来源:上海百蕊生物科技有限公司   2010年09月13日 17:12  

ELISA 是一种敏感性高、特异性强、重复性好的实验诊断方法,由于其试剂稳定、易保存、操作简便、结果判断较客观等因素,以及既适宜于大规模筛查试验又可以用于少量标本的检测,既可以做定性试验也可以做定量分析等优点,已广泛应用于微生物学、寄生虫学、肿瘤学和细胞因子等领域。ELISA 的影响因素较多,加强质量管理才能充分发挥其方法学的优点。

ELISA 原理

●根据检测目的和操作步骤不同有三种基本方法。
●双抗体(原)夹心法检测抗原(体)的常见方法,应用针对抗原两个不同决定族的两种单抗分别作为固相载体和酶标抗体检测溶液中的抗原(适用于二价以上抗原,不能测小分子半抗原)。
●间接法检测抗体的方法,利用酶标记的抗抗体(第二抗体)检测已与固相抗原结合的抗体。
●竞争法检测抗原或小分子半抗原、抗体,以测抗原为例,使待测抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,结果如待测抗原含量越多,与固相抗体结合的酶标抗原就越少,显色越浅,二者呈负相关。

分析前质控
●人员培训实验是人操作的,因此检验人员需经过培训,熟练掌握本专业如下几方面的技术知识:
◎检验项目的基本原理(ELISA 原理);
◎临床意义;
◎熟悉检测技巧,了解易出差错的环节及难点;
◎熟悉检测试剂性能(包括试剂盒组成,包被片段及其组成);
◎ 熟悉检测仪器的原理及性能;掌握数据处理的能力和质量控制知识。
◎某些特殊项目的检测如抗HIV 等需经有关部门组织的专门培训班,考试合格后持证上岗。
分析前质控
◎ELISA 原理:1971 年Engvall 等人把免疫组化的EIA 技术应用于临床检验发展为ELISA 技术。
特点:在固相表面组装免疫活性物质形成"免疫吸附剂"
酶标记免疫活性物质,进行信号放大;
有二步温育反应二次洗涤过程;
灵敏度特异性相对较高。
局限性:只能检测到ng 水平
精密度差(批内CV15-20%);
线性范围窄(一个数量级);
存在"HD-HOOK" 效应。
 
ELISA 今后的发展方向

●聚苯乙烯表面的制备。已有的技术是酰肼化;*化;预包被多聚赖氨酸等,均是产品。
●酶促信号放大的改变,如酶促荧光、酶促化学发光等。

ELISA 临床意义

●各型肝炎的特征及标志物
乙肝二对半的模式及临床意义
HBsAg HBeAg HBcAb-IgG HBcAg-IgM HBeAb HBsAb &n bsp; 临床意义
---- 急性HBV 感染早期HBV 复制活跃
-- 急慢性HBV 感染,HBV 复制活跃
- -- 急慢性HBV 感染,HBV 复制中跃
- - 急慢性HBV 感染,HBV 复制低跃
- - -HBV 复制停止或极低
-- -- 平静的HBV 携带状态,HbsAg
-- ---HBV 既往感染,未产生抗-HBs
-- -抗HBs 出现前期,HBV 复制低
-- - HBV 感染恢复期
-- -- HBV 感染恢复期
- 不同亚型HBV再感染
-----HBV-DNA整合
-----+ 病后或接种疫苗后获得免疫

 

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